Vergleichende Analyse der anthelmintischen Wirksamkeit europäischer Heidekrautextrakte auf das Schlüpfen von Eiern von Teladorsagia Circumcincta und Trichostrongylus colubriformis und die Larvenmotilität

Parasites & Vectors Band 15, Artikelnummer: 409 (2022) Diesen Artikel zitieren

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Die Bekämpfung gastrointestinaler Nematoden (GIN) wird traditionell durch den Einsatz von Anthelminthika erreicht. Aufgrund der Vorschriften im ökologischen Landbau und der zunehmenden Resistenz gegen Anthelminthika wird jedoch nach Alternativen gesucht. Eine vielversprechende Alternative ist der Einsatz bioaktiver Pflanzenfütterung aufgrund des Vorhandenseins pflanzlicher Sekundärmetaboliten (PSMs) wie Proanthocyanidine (PAs). Diese Studie konzentrierte sich auf die mehrjährige Strauchheide (Familie der Ericaceae), eine Pflanze, die reich an PAs ist, in ganz Europa häufig vorkommt und ein bereits nachgewiesenes anthelmintisches Potenzial aufweist.

In-vitro-Tests wurden verwendet, um die anthelmintische Wirksamkeit von Heidekraut gegen das Schlüpfen von Eiern und die Motilität der Larven zu untersuchen. Über zwei Saisons hinweg wurden Heideproben aus fünf europäischen Ländern gesammelt und die Extrakte gegen zwei GIN-Arten getestet: Teladorsagiacircumcincta und Trichostrongylus colubriformis. Eine Polyphenolgruppen-spezifische Ultraperformance-Flüssigkeitschromatographie-Tandem-Massenspektrometrieanalyse wurde durchgeführt, um relevante vorhandene Polyphenol-Untergruppen zu identifizieren, einschließlich der PA-Konzentration sowie der Größe und des Verhältnisses der Untereinheiten. Eine partielle Analyse der kleinsten Quadrate wurde durchgeführt, um die Wirksamkeit mit der Variation der PSM-Zusammensetzung in Verbindung zu bringen.

Heideextrakte reduzierten das Ausbrüten von Eiern beider GIN-Arten dosisabhängig um bis zu 100 %, während drei Extrakte in der höchsten Konzentration (10 mg/ml) die Larvenmotilität auf ein Niveau reduzierten, das sich nicht signifikant von der Kontrolle toter Larven unterschied. PAs, insbesondere vom Procyanidin-Typ, und Flavonolderivate wurden mit einer anthelmintischen Aktivität in Verbindung gebracht, und die bestimmte Untergruppe von Polyphenolen, die mit der Wirksamkeit in Verbindung gebracht wurde, hing von der GIN-Art und dem Lebensstadium ab.

Unsere Ergebnisse liefern In-vitro-Beweise dafür, dass Heidekraut, eine weit verbreitete Pflanze, die in Weidesystemen häufig als Unkraut bewirtschaftet wird, anthelmintische Eigenschaften aufweist, die verschiedenen PSM-Gruppen zugeschrieben werden, und zu einer nachhaltigen GIN-Kontrolle in Wiederkäuer-Produktionssystemen in ganz Europa beitragen könnte.

Parasitismus wurde als die größte Gesundheitsherausforderung für Wiederkäuer identifiziert [1], wobei gastrointestinale Nematoden (GIN) in ganz Europa eine hohe Prävalenz in landwirtschaftlichen Betrieben aufweisen, was zu erheblichen Produktionskosten und Tierschutzeinbußen führen kann. Tatsächlich wurden in mindestens 50 % der landwirtschaftlichen Betriebe weltweit wirtschaftliche Verluste durch Parasitismus festgestellt [2, 3], wobei GIN die Wiederkäuerhaltung in Europa durchschnittlich 686 Millionen Euro pro Jahr kostet [4]. Die Prävalenz von GIN in einigen europäischen Ländern kann auf Schaffarmen bis zu 100 % betragen [5, 6], und eine globale Überprüfung ergab, dass GIN-Infektionen bei Schafen in 86 % der untersuchten Studien zu negativen Auswirkungen auf die Produktion führten [7]. Eine hohe GIN-Prävalenz ist auch auf Rinderfarmen zu beobachten, da eine britische Studie ergab, dass 89 % der Rinder in englischen und walisischen Schlachthöfen Anzeichen von GIN aufwiesen [8]. Angesichts des weltweiten Anstiegs der Anthelminthika-Resistenz in den letzten 50 Jahren [9] und der Entwicklung hin zu ökologischen und ressourcenschonenden Anbausystemen [10] sind alternative GIN-Kontrollstrategien erforderlich, um den Einsatz synthetischer Anthelminthika zu ersetzen oder zu ergänzen. Es besteht ein zunehmendes Interesse am Einsatz bioaktiver Pflanzenfütterung als nachhaltige GIN-Kontrollmethode, insbesondere bei kleinen Wiederkäuern. Zahlreiche In-vitro-Studien haben das anthelmintische Potenzial von Pflanzenextrakten, die reich an Wirkstoffen sind, in einer Reihe von GIN-Lebensstadien nachgewiesen. Die anthelmintische Aktivität vieler bioaktiver Pflanzen wird häufig Proanthocyanidinen (PAs; Synonym: kondensierte Tannine) zugeschrieben [11,12,13], obwohl andere pflanzliche Sekundärmetaboliten (PSMs; auch als pflanzenspezialisierte Metaboliten bekannt), einschließlich hydrolysierbarer Tannine und Flavonoide, wurden beteiligt [14, 15]. Darüber hinaus haben Studien gezeigt, dass die anthelmintische Aktivität bioaktiver Pflanzen zwischen verschiedenen GIN-Arten variiert, was darauf hindeutet, dass die Wirksamkeit möglicherweise spezifisch für GIN-Arten ist [13, 16, 17].

Das mehrjährige Strauchheidekraut kommt in vielen europäischen Ländern sehr häufig vor, was auf die Eignung der Pflanze als Futtermittel hinweist, und ist reich an PAs [12]. Frühere Studien haben gezeigt, dass spanische Heidekrautextrakte in vitro anthelmintische Wirkungen auf die GIN-Ausscheidung von infektiösen Larven im dritten Stadium (L3), die Motilität von Erwachsenen und die Hemmung des Eischlüpfens haben [18, 19]. Es ist bekannt, dass die relative chemische Zusammensetzung von Heide je nach geografischem Standort, Jahreszeit und Art variiert [11, 20,21,22]. Beispielsweise lag der in verschiedenen Studien gemessene Gesamtphenolgehalt in Heidekraut zwischen 94 und 118 g Gerbsäureäquivalent (TAE) pro Kilogramm Trockenmasse (TM) Heidekraut [23,24,25], während der Gesamtgehalt an Tanninen zwischen 64 und 86 schwankte g TAE/kg TM [11, 23,24,25]. Der Einfluss dieser Variationen in der chemischen Zusammensetzung von Heidekraut auf die beobachtete Variation der anthelmintischen Wirksamkeit wurde noch nicht untersucht. Eine Untersuchung dieser Beziehung ist wichtig, um festzustellen, ob Heidekraut als alternative Strategie zur GIN-Kontrolle in allen europäischen Landwirtschaftssystemen eine Rolle spielen kann.

Ziel dieser Studie war es, eine vergleichende Analyse der anthelmintischen Wirksamkeit von Calluna vulgaris-Extrakt anhand von Proben durchzuführen, die in fünf europäischen Ländern, in denen C. vulgaris heimisch ist, über zwei Saisons hinweg gesammelt und gegen zwei GIN-Arten getestet wurden. Da es in Spanien neben C. vulgaris zwei gleichermaßen verbreitete und heimische Arten gibt, wurden auch Erica cinerea-Proben aus Spanien gesammelt. Es wurde die Hypothese aufgestellt, dass die anthelmintische Wirkung der Heideextrakte durch ihren Tanningehalt (PAs und hydrolysierbare Tannine) bestimmt wird, da dieser im Allgemeinen von Umweltfaktoren wie dem Land, der Jahreszeit (lokale Bedingungen) und der Pflanzenart beeinflusst wird. Es wurde auch die Hypothese aufgestellt, dass die anthelmintische Wirkung von Heideextrakten je nach GIN-Art und Lebensstadium unterschiedlich sein wird.

Heideproben aus fünf europäischen Ländern, nämlich Deutschland, Norwegen, Spanien, der Schweiz und dem Vereinigten Königreich, wurden gesammelt und zur Trocknung und Extraktion an das Scotland's Rural College (SRUC) in Edinburgh geschickt. Heidekraut-Winterproben wurden zwischen Januar und März geerntet (mit Ausnahme der Schweiz, wo die Sammlung aufgrund des Schnees am Standort im April abgeschlossen wurde) und Frühjahrsproben von März bis Mai. An jedem Standort wurden die gleichen Erfassungs- und Verarbeitungsprotokolle befolgt (Einzelheiten siehe Zusatzdatei 1: Text S1, Zusatzdatei 1: Abbildung S1). Einzelheiten zu den gesammelten Heidekrautproben sind in Tabelle 1 aufgeführt. Die Umgebungsbedingungen und GPS-Koordinaten an den Standorten der Heidekrautsammlung sind in der Zusatzdatei 2: Tabelle S1 enthalten. Nach Erhalt bei SRUC wurden die Proben bei 25 °C getrocknet, bis das Trockengewicht erreicht war, das durch aufeinanderfolgendes Wiegen bestimmt wurde. Die getrockneten Proben wurden dann zu Pulver vermischt, in Polyethylenbeutel und Aluminiumfolie eingewickelt, um Lichteinwirkung zu vermeiden, und bis zur weiteren Analyse bei –70 °C gelagert.

Die Extraktionsmethode für dieses Protokoll wurde von Gutu [26] übernommen. Kurz gesagt, 10 g pulverisiertes Heidekraut wurden in 100 ml Aceton/Wasser-Lösung (70:30, Vol./Vol.) chemisch mazeriert [27]. Die Lösungen wurden 72 Stunden lang bei Raumtemperatur kontinuierlich auf einem Magnetrührer gerührt [28] und dann durch vier Lagen Miracloth (Calbiochem®) filtriert. Das Filtrat wurde 3 Minuten lang bei 4500 U/min zentrifugiert und zweimal in einem Rotationsverdampfer getrocknet, um alles Wasser und Aceton zu entfernen. Die Extrakte wurden bis zu ihrer Verwendung in In-vitro-Tests und chemischen Analysen bei –20 °C gelagert.

Die Methoden zur chemischen Analyse der Heideextrakte werden von Malisch et al. beschrieben. [14]. Es wurde wiederholt gezeigt, dass Tannine zur antiparasitären Wirkung von Pflanzen beitragen und darüber hinaus wurde gezeigt, dass Flavonole die antiparasitäre Wirkung von Tanninen positiv beeinflussen [29]. Aus diesen Gründen haben wir uns auf diese Polyphenoltypen konzentriert und für deren Quantifizierung eine polyphenolgruppenspezifische Ultraperformance-Flüssigkeitschromatographie-Tandem-Massenspektrometrie-Analyse (UPLC-MS/MS) eingesetzt [30]. Die Extrakte wurden lyophilisiert und in 1 ml gereinigtem Milli-Q-Wasser gelöst, 5 Minuten lang gevortext und durch einen 0,20-µm-Polytetrafluorethylenfilter (PTFE) in UPLC-Fläschchen filtriert. Die Probe wurde 1:5 mit Wasser verdünnt und nach Engström et al. analysiert. [31, 32] auf einem Acquity UPLC-System (Waters Corp., Milford, MA, USA), verbunden mit einem Xevo TQ Triple-Quadrupol-Massenspektrometer mit Elektrospray-Ionisation (Waters Corp.).

Die in dieser Studie verwendeten GIN-Arten sind zwei der in europäischen Ländern am häufigsten vorkommenden GIN von Schafen [5, 6, 33]: Teladorsagia Circumcincta (Magenmagen) und Trichostrongylus colubriformis (Darm). Die GIN-infektiösen Larven wurden ursprünglich vom Moredun Research Institute, Schottland (T. Circumcincta) und der Toulouse Veterinary School, Frankreich (T. Colubriformis) erhalten, um Spenderschafe am SRUC zu infizieren. Insgesamt wurden sechs Spenderschafe monospezifisch infiziert, vier mit 15.000 T. Circumcincta L3 und zwei mit 15.000 T. Colubriformis L3, und diese Tiere produzierten alle Eier und L3, die in den unten beschriebenen Experimenten verwendet wurden.

Frische Kotproben wurden aus dem Rektum von Spenderschafen entnommen und die Eier mit einer zuvor von Christie und Jackson [34] beschriebenen Flotationstechnik unter Verwendung einer 1,2 g/ml Natriumchloridlösung isoliert. Die Eier wurden dann in einer Wassersuspension gewonnen und innerhalb der Art gepoolt; In jede Vertiefung einer Platte mit 96 Vertiefungen wurden etwa 100–200 Eier gegeben. Für die Stammlösung des Heideextrakts wurden 50 mg extrahiertes Heidekraut in 100 µl einer 50 %igen Dimethylsulfoxidlösung (DMSO) zusammen mit 25 % phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) und 25 % destilliertem Wasser (dH2O) gelöst. Es wurden Reihenverdünnungen von Heidekrautextrakten durchgeführt, bevor dann 6 µl frisch zubereiteter Heidekrautextrakt in jede Vertiefung gegeben wurden (n = 3); Bei Bedarf wurde zusätzliches Wasser hinzugefügt, um ein Gesamtvolumen von 300 µl zu erreichen. Dies führte zu Endkonzentrationen des Heideextrakts von 0,625, 1,25, 2,5, 5 bzw. 10 mg/ml. Negativkontrollvertiefungen (n = 3) enthielten das gleiche Volumen Eisuspension zusammen mit 6 µl 50 %iger DMSO-Lösung ohne Heideextrakt. Die endgültigen DMSO-Konzentrationen betrugen 1 % pro Vertiefung sowohl für die Behandlungs- als auch für die Kontrollvertiefungen, was sich zuvor als gut verträglich für Parasiten erwiesen hat [35, 36]. Der Test wurde bei Raumtemperatur (22 °C) durchgeführt und das Schlüpfen wurde am Ende eines 48-Stunden-Zeitraums durch Zugabe von 20 µl Lugol-Reagenz in jede Vertiefung gestoppt. Die Anzahl der nicht geschlüpften Eier und Larven im ersten Stadium (L1) pro Vertiefung wurde unter einem umgekehrten Mikroskop gezählt. Der Prozentsatz der geschlüpften Eier wurde anhand der folgenden Gleichung berechnet:

Um den Beitrag von Tanninen zur beobachteten anthelmintischen Aktivität zu untersuchen, wurde eine zweite Reihe von Eierschlupftests (EHA) durchgeführt, wobei nur die höchste Konzentration an Heideextrakt (10 mg/ml) verwendet wurde, der mit Polyvinylpolypyrrolidon (PVPP) inkubiert wurde. PVPP ist ein Wirkstoff, der mit Tanninen Komplexe bilden und so deren Wirkung aufheben kann. Die Extrakte wurden über Nacht mit PVPP im Verhältnis 1:10 inkubiert, wie in Zabré et al. beschrieben. [37], dann 3 Minuten lang bei 4500 U/min zentrifugiert; Der Überstand wurde als „PVPP-Extrakt“ verwendet. Wie zuvor beschrieben, wurden dann 100–200 Eier mit Extrakten, die mit oder ohne PVPP inkubiert wurden, in die Vertiefungen gelegt; Es waren auch Nicht-Heidekraut-Kontrollen enthalten (6 µl 50 % DMSO-Lösung), die ebenfalls mit oder ohne PVPP bei einem Gesamtvolumen von 300 µl pro Vertiefung (1 % DMSO pro Vertiefung) inkubiert wurden. Die Behandlungen wurden in dreifacher Ausfertigung und wie zuvor beschrieben durchgeführt; Das Schlüpfen wurde am Ende von 48 Stunden durch Zugabe von 20 µl Lugol-Reagenz in jede Vertiefung gestoppt.

Die GIN L3 wurden aus Kotproben der Spenderschafe nach einer 10-tägigen Inkubationszeit bei 20 °C unter Verwendung der Baermann-Technik gewonnen und vor der Verwendung im Test für eine maximale Dauer von 3 Monaten bei 4 °C gelagert. Zur Überwachung der Larvenmotilität wurde die Echtzeit-Zellanalyse (RTCA) auf dem xCELLigence Real Time Cell Analyzer (ACEA Biosciences, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) verwendet. In diesem System wird die Bewegung auf der Grundlage elektrischer impedanzbasierter Signale über ineinandergreifende Mikroelektroden erfasst, die in den Boden von Gewebekultur-E-Platten (Agilent Technologies) integriert sind. Diese Methode wurde zuvor für das Screening und die Resistenzüberwachung von Anthelminthika verwendet [38] und von Athanasiadou et al. modifiziert. [39] zur Überwachung und Quantifizierung der Wirksamkeit von Pflanzenextrakten. Insgesamt wurden 3000 L3 in jede Vertiefung der E-Platte gegeben und 24 Stunden lang alle 15 Sekunden Messungen vorgenommen, um einen Basiswert für die Motilität zu erhalten. Nach 24 Stunden wurden 4 µl der Heidekrautextrakte in jede Vertiefung gegeben, was ein Endreaktionsvolumen von 200 µl und eine Endkonzentration des DM-Heidekrautextrakts von 10 mg/ml ergab, um der höchsten in der EHA verwendeten Konzentration zu entsprechen. Eine Reihe dreifacher Kontrollvertiefungen war enthalten: (i) 3000 tote L3 (zuvor für 30 Minuten in Milton®-Sterilisationsflüssigkeit gelegt; Proctor & Gamble, Cincinnati, OH, USA); ii) 3000 L3, die durchgehend am Leben gehalten wurden; und (iii) zwei Sätze technischer Kontrollbrunnen ohne L3, die jedoch stattdessen eine 50 %ige PBS-Lösung enthalten. Alle Kontrollvertiefungen, mit Ausnahme einer Reihe technischer Kontrollen, die das Signal ausschließlich von Heidekrautextrakt maßen, erhielten nach den ersten 24 Stunden 4 µl 50 % PBS anstelle von Heidekrautextrakt. Hier wurde die gleiche Stammlösung von Heidekrautextrakt verwendet, die in 50 % DMSO für die EHA gelöst wurde. Daher wurden zusätzliche Kontrollplatten verwendet, um zu zeigen, dass DMSO- und PBS-Kontrollen keinen Einfluss auf die Larvenmotilität hatten. Die Larvenmotilität wurde über einen weiteren Zeitraum von 24 Stunden nach der Zugabe von Heidekrautextrakt oder 50 % PBS überwacht. Es wurden vier Experimente durchgeführt, zwei für T. Circumcincta und zwei für T. Colubriformis, und zwar innerhalb jeder GIN-Art; Ein Experiment sollte die Auswirkungen von C. vulgaris-Extrakten je nach Land und Jahreszeit testen, und das andere Experiment sollte die Auswirkungen von Heidearten und Jahreszeiten auf die spanischen Proben testen.

Eine Hauptkomponentenanalyse (PCA) wurde durchgeführt, um die Variation der Polyphenol-Untergruppenkonzentrationen in jedem Heideextrakt zusammenzufassen. PCA-Diagramme wurden mit den Paketen devtools [40] und ggbiplot [41] in R (Version 4.1.0) erstellt.

Ein multivariater Varianzanalysetest (ANOVA) mit einer multiplen Vergleichskorrektur nach Fisher's Protected Least Significant Difference (LSD) wurde verwendet, um eine vergleichende Analyse der Auswirkungen von Heidekrautextrakten auf das Schlüpfen von Eiern durchzuführen. Ziel dieses Tests war es, die Auswirkung der gesammelten Jahreszeit, des Herkunftslandes, der getesteten GIN-Arten und der Konzentration des C. vulgaris-Extrakts auf das Schlüpfen von T. Circumcincta bzw. T. Colubriformis zu analysieren. Eine ANOVA wurde durchgeführt, um den Einfluss von Heidearten aus den spanischen Proben sowie den PVPP-Effekt zu bestimmen. Die tödliche Extraktdosis, die das Schlüpfen von Eiern um 50 % verhinderte (LD50), wurde mithilfe der Probit-Analyse berechnet. Alle Tests wurden mit Genstat® 16. Ausgabe (2019; VSN International Ltd.) durchgeführt.

Impedanzdaten wurden auf R (Version 4.1.0) verarbeitet, wobei die Variabilität des Zellindex in den Motilitätsindex umgewandelt wurde [39]. Die Motilitätsindexwerte für 5 Stunden vor der Zugabe des Extrakts und die letzten 5 Stunden nach der Zugabe des Extrakts wurden für jede Vertiefung gemittelt und dann mit Genstat® 16. Ausgabe (2019; VSN International) analysiert. Dieses Zeitfenster (am Ende jedes 24-Stunden-Zeitraums) wurde für Analysen gewählt, damit sich der Extrakt abgesetzt hatte und nicht zu den Motilitätsmessungen beitrug, und um dem Extrakt Zeit zu geben, seine Wirkung zu entfalten. Eine einfaktorielle ANOVA wurde verwendet, um den Einfluss des Heideextrakts auf die Motilität der Larven zu analysieren, während die durchschnittliche Motilität vor der Zugabe des Extrakts als Kovariate verwendet wurde. Wenn der Einfluss der Kovariate nicht signifikant war (P > 0,05), wurde sie aus dem Modell entfernt, um eine Verzerrung der Daten zu verhindern. Die Nullhypothese lautete, dass sich die Motilität von Larven, die Heidekrautextrakt ausgesetzt waren, deutlich von der der toten Larven unterscheiden würde (P < 0,05), nicht jedoch von der der lebenden Kontrolllarven (P > 0,05). Eine zusätzliche Zwei-Wege-ANOVA wurde durchgeführt, um die Larvenmotilität mit den Behandlungsfaktoren in Verbindung zu bringen: Jahreszeit, Land und Heidearten.

Um herauszufinden, welche Polyphenol-Untergruppenkombinationen stärker mit der anthelmintischen Aktivität (LD50 aus EHA oder Motilitätswerten) assoziiert sind, haben wir partielle kleinste Quadrate (PLS)-Regressionen mit dem mixOmics-Paket [42] in R (Version 4.1.0) berechnet. PLS-Modelle sind für diese Analyse geeignet, da die Korrelationen zwischen den verschiedenen erklärenden Variablen (z. B. Polyphenol-Untergruppen) berücksichtigt werden. Die Anzahl der verwendeten latenten Variablen wurde durch „Leave-one-out“-Kreuzvalidierung bestimmt. Darüber hinaus liefern PLS-Modelle für jede erklärende Variable einen VIP-Score (Variable Wichtigkeit in der Projektion) und ermöglichen so die Identifizierung erklärender Variablen, die enger mit der Variation der abhängigen Variablen verbunden sind. Es wurden auch Regressionskoeffizienten erstellt, die die Stärke und Richtung der Assoziationen angeben.

Die Ergebnisse der chemischen Analyse der Heideextrakte sind in Tabelle 2 aufgeführt. Die in den Analysen quantifizierten Polyphenol-Untergruppen waren PAs (Procyanidin [PC]- und Prodelphinidin [PD]-Untereinheiten), hydrolysierbare Tannine (Galloyl- und Hexahydroxydiphenoyl [HHDP]-Derivate), Flavonol-Derivate (Kaempferol-, Quercetin- und Myricetin-Derivate) und Chinasäure-Derivate (z. B. Caffeoylchinasäuren). Die PAs in den untersuchten Extrakten wurden von PC-Untereinheiten dominiert, wobei die spanischen Extrakte das höchste PD:PC-Verhältnis aufwiesen. Bei vielen der untersuchten Extrakte wiesen die im Winter gesammelten Proben höhere Konzentrationen der quantifizierten Polyphenol-Untergruppen auf, mit Ausnahme der in Spanien gesammelten Proben. Allerdings wiesen Extrakte aus Frühlingsproben durchweg einen höheren mittleren Polymerisationsgrad (mDP) von PAs auf als Winterproben aus demselben Land.

Die ersten beiden Hauptkomponenten der PCA unter Verwendung von C. vulgaris-Extrakten erklärten 74,9 % der Variation in der Konzentration der Polyphenol-Untergruppe. Es gab keine signifikante Häufung der Proben aufgrund der Sammlungssaison oder des Herkunftslandes und die beiden Replikate für jeden Extrakt waren ähnlich. Das PCA-Diagramm für C. vulgaris (Abb. 1) zeigt, wie Heideextrakte in der Konzentration der Polyphenol-Untergruppe variieren. Beispielsweise weisen Heidekrautextrakte aus Spanien die höchsten Gehalte an PD-Untereinheiten und HHDP-Derivaten auf, während der Gehalt an Chinasäurederivaten in Schweizer Heidekrautextrakten, die im Winter gesammelt wurden, und in norwegischen Heidekrautextrakten, die über beide Jahreszeiten hinweg gesammelt wurden, am höchsten war.

Hauptkomponentenanalyse-Diagramm (PCA) von Calluna vulgaris-Proben. Für jedes entsprechende Land und jede Saison werden zwei Wiederholungen angezeigt. Die Länge des Pfeils stellt die Größe der Beladung dar, die wiederum den Beitrag der erklärenden Variablen (dh der Polyphenol-Untergruppe) zur Bestimmung der Hauptkomponenten (PCs) angibt. Jede Polyphenol-Untergruppe wird durch die ersten vier Buchstaben ihres Namens dargestellt. Gall, Galloyl-Derivate; HHDP, Hexahydroxydiphenoyl-Derivate, Kaem, Kaempferol-Derivate; Myri, Myricetin-Derivate; Proc, Procyanidin-Untereinheiten; Prod, Prodelphinidin-Untereinheiten; Quer, Quercetin-Derivate; Quin, Chinasäurederivate

Beim Vergleich spanischer Extrakte (Abb. 2) erklärten die ersten beiden Hauptkomponenten des PCA 93,8 % der Variation in der Konzentration der Polyphenol-Untergruppe. Unterschiede in der Konzentration der Polyphenol-Untergruppe wurden zwischen der Sammelsaison und den Arten der Heidekrautextrakte beobachtet. Im Allgemeinen waren die Konzentrationen in C. vulgaris-Extrakten höher als in E. cinerea-Extrakten, obwohl Extrakte aus im Frühjahr gesammelten E. cinerea-Proben höhere Werte an PD-Untereinheiten von PAs aufwiesen.

PCA-Diagramm spanischer Proben. Für jede entsprechende Heideart und Jahreszeit werden zwei Wiederholungen angezeigt. Die Länge des Pfeils stellt die Größe der Beladung dar, die wiederum den Beitrag der erklärenden Variablen (dh der Polyphenol-Untergruppe) zur Bestimmung der PCs angibt. Jede Polyphenol-Untergruppe wird durch die ersten vier Buchstaben ihres Namens dargestellt (siehe Bildunterschrift zu Abb. 1).

Die durchschnittliche Brutrate der Eier in den Kontrollvertiefungen betrug bei beiden GIN-Arten 97,9 % (Standardfehler [SE]: 0,59). Die Konzentration von C. vulgaris-Extrakten interagierte mit der Jahreszeit, der GIN-Art und dem Land als Vier-Wege-Wechselwirkung (F(16, 196) = 4,95, P < 0,001). Obwohl es bei C. vulgaris-Extraktkonzentrationen von 0,625, 1,25 (kein signifikanter Unterschied zur Kontrolle) und 10 mg/ml (alle signifikant unterschiedlich zur Kontrolle) keinen Unterschied beim Schlüpfen von Eiern zwischen den Jahreszeiten oder Ländern gab, wurden Konzentrationen von 2,5 und 5 mg erreicht /ml zeigte, dass das Schlüpfen von Eiern in C. vulgaris-Extrakten aus Frühlingsproben deutlich geringer war als das Schlüpfen von Eiern in Extrakten aus Winterproben. Extrakte mit einer Konzentration von 5 mg/ml zeigten auch große Unterschiede beim Schlüpfen von Eiern zwischen den Ländern: Bei dieser Konzentration schlüpften fast keine GIN-Eier, die Extrakten aus dem Vereinigten Königreich und Spanien ausgesetzt waren, was auch für T. Circumcincta-Eier zutraf, die Schweizer Extrakten ausgesetzt waren. Im Gegensatz dazu lagen die durchschnittlichen Schlupfraten in den übrigen Ländern und bei Schweizer Extrakten, die T. colubriformis ausgesetzt waren, zwischen 23,4 % und 47,9 %. Es gab eine signifikante Wechselwirkung zwischen der GIN-Art und der Jahreszeit (F(1, 196) = 46,57, P < 0,001), wobei der Prozentsatz der ausgeschlüpften Eier von T. Circumcincta niedriger war als der von T. Colubriformis, der in Vertiefungen schlüpfte, in denen die Eier brüteten in Winterextrakten, aber bei der Inkubation von Eiern mit Frühlingsextrakten wurde für beide GIN ein ähnliches Ausbrüten der Eier beobachtet. Diagramme, die die Wechselwirkungen zeigen, sind in Abb. 3 (T. circacincta) und Abb. 4 (T. colubriformis) für C. vulgaris-Extrakte dargestellt. Die Brutprozentsätze und P-Werte für C. vulgaris sind in der Zusatzdatei 3: Tabelle S2 aufgeführt.

Eierschlüpfen (%) und Standardfehler (SE)-Balken für Teladorsagia Circumcincta-Eier, die 2,5 und 5 mg/ml C. vulgaris-Extrakt aus jedem an der Studie teilnehmenden Land ausgesetzt waren

Eischlüpfen (%) und SE-Balken für Trichostrongylus colubriformis-Eier, die 2,5 und 5 mg/ml C. vulgaris-Extrakt aus jedem an der Studie teilnehmenden Land ausgesetzt waren

Wie oben bei C. vulgaris-Proben gezeigt, zeigten bei spanischen Proben nur Extrakte mit 2,5 und 5 mg/ml Unterschiede in der anthelmintischen Wirksamkeit, und dies hing von der Jahreszeit, den Heidearten und den GIN-Arten als Vier-Wege-Wechselwirkung ab (F(4, 79). ) = 7,26, P < 0,001). Bei Eiern, die Extrakten aus Winterproben in einer Menge von 2,5 mg/ml ausgesetzt waren, schwankte die Schlupfrate zwischen den Heidekrautarten nicht, wohingegen die Schlupfrate bei Frühlingsproben bei Eiern, die C. vulgaris-Extrakten ausgesetzt waren, geringer war. Bei Einwirkung von Extrakten in einer Konzentration von 5 mg/ml schlüpfte in allen Vertiefungen nur eine sehr geringe Anzahl von Eiern, mit Ausnahme der T. colubriformis-Eier, die im Winter gesammelten E. cinerea-Extrakten ausgesetzt waren und für die eine durchschnittliche Schlüpfrate von 55,1 % (SE) ermittelt wurde 7.04) wurde aufgezeichnet. Die Brutprozentsätze und P-Werte für die spanischen Proben sind in der Zusatzdatei 3: Tabelle S3 aufgeführt.

Die aus den fünf Extraktkonzentrationen und drei Wiederholungen für jede Heideprobe berechneten LD50-Werte lagen zwischen 2,23 und 8,51 mg/ml, wobei der LD50-Wert von der gesammelten Jahreszeit, dem Herkunftsland, den Heidearten und den GIN-Arten abhängt (Tabelle 3). Die niedrigsten LD50-Werte, die auf eine höhere Wirksamkeit hinweisen, wurden beim Testen von im Frühjahr gesammelten C. vulgaris-Proben aus Großbritannien und Spanien sowie gegen T. Circumcincta gefunden.

Die Inkubation von Extrakten mit PVPP führte im Vergleich zu denen, die ohne PVPP inkubiert wurden, zu einem höheren Ausschlüpfen von Eiern (F(1, 142) = 1852,67, P < 0,001). Die durchschnittliche Schlüpfrate für Eier, die in Heideextrakten mit 10 mg/ml ohne PVPP und mit PVPP inkubiert wurden, betrug 0,87 % (SE: 0,27) bzw. 82,2 % (SE: 1,87). Die Prozentsätze der Eiausbrütung für jeden Extrakt, der mit oder ohne PVPP inkubiert wurde, sind in Abb. 5 für Tests an Eiern von T. Circumcincta und in Abb. 6 für Tests an Eiern von T. Colubriformis dargestellt.

Bruteier (%) und SE-Riegel von T. Circumcincta-Eiern, behandelt mit 10 mg/ml Heideextrakt, inkubiert ohne PVPP oder mit PVPP (n = 3). PVPP, Polyvinylpolypyrrolidon; C. vul, Calluna vulgaris; E. cin, Erica cinerea

Bruteier (%) und SE-Riegel von T. colubriformis-Eiern, behandelt mit 10 mg/ml Heideextrakt, inkubiert ohne PVPP oder mit PVPP (n = 3)

Während der Larvenmotilitätstests verhielten sich alle Kontrollen (totes L3, lebendes L3 und technische Kontrollen) wie erwartet (Abb. 7). Die Variation der Motilität vor der Zugabe von C. vulgaris-Extrakt erklärte keine der Variationen während der Zugabe der Extrakte und wurde daher nicht als Kovariate in die Folgeanalysen einbezogen (P > 0,05). Außerdem hatte 1 % DMSO keinen Einfluss auf die Larvenmotilität (F(1, 4) = 0,91, P = 0,393), was darauf hindeutet, dass etwaige Veränderungen der Larvenmotilität in den Behandlungsbrunnen ausschließlich dem Heidekrautextrakt zugeschrieben wurden.

Mittlere Motilitätswerte mit SE-Balken über 48 Stunden für lebende, tote und technische Kontrollen, die im T. colubriformis-Saison-×-Land-Echtzeit-Zellanalysetest verwendet wurden (n = 3). Die Motilitätswerte für zwei der Extrakte, aus denen die Nullhypothese zurückgewiesen werden konnte, sind als Referenz enthalten. PBS, phosphatgepufferte Kochsalzlösung; W, Auszug aus im Winter gesammelten Proben

Unsere Nullhypothese, dass sich die Motilität von Larven, die Heideextrakt ausgesetzt waren, signifikant von der der toten Larven unterscheidet (P < 0,05), nicht jedoch von der der lebenden Kontrolllarven (P > 0,05), wurde dreimal abgelehnt, nämlich als T .Circumcincta-Larven wurden in Winterproben von E. cinerea inkubiert, und T. colubriformis-Larven wurden in Winterproben aus der Schweiz bzw. Deutschland inkubiert. In vielen Fällen war die Larvenmotilität in den Behandlungsvertiefungen im Vergleich zur Motilität der lebenden Kontrolllarven geringer, unterschied sich jedoch immer noch deutlich von der Motilität der toten Kontrolllarven. Die Vertiefungen mit Proben von C. vulgaris-Extrakten aus Großbritannien und E. cinerea-Extrakten aus Spanien, die alle im Frühjahr gesammelt und an T. colubriformis getestet wurden, ergaben Motilitätswerte, die sich nicht von denen lebender Kontrollen unterschieden. Diese Ergebnisse zeigten das Fehlen jeglicher anthelmintischer Wirkung. Die durchschnittlichen Larvenmotilitätswerte sind in Tabelle 4 aufgeführt.

Die Zwei-Wege-ANOVA zeigte, dass die Motilität von T. colubriformis durch die Jahreszeit signifikant beeinflusst wurde, wobei die Larven sowohl in C. vulgaris (F(1, 20) = 11,27, P = 0,003) als auch in E. cinerea (F(1, 7)) inkubiert wurden. = 10,30, P = 0,015) im Winter gesammelte Extrakte mit geringerer Motilität als diejenigen, die in den jeweiligen im Frühjahr gesammelten Extrakten inkubiert wurden. Bei den spanischen Extrakten zeigte sich eine Tendenz zu einer signifikanten Wechselwirkung zwischen Jahreszeit und Heidearten; T. colubriformis-Larven, die in C. vulgaris-Frühlingsextrakten und in E. cinerea-Winterextrakten inkubiert wurden, hatten die niedrigste Motilität (F(1, 7) = 4,29, P = 0,077). Die Motilität von T. Circumcincta-Larven wurde tendenziell vom Land beeinflusst (F(4, 20) = 2,47, P = 0,078), wobei in den Extrakten aus Norwegen inkubierte Larven eine geringere Motilität aufwiesen als diejenigen, die in Extrakten aus der Schweiz und dem Vereinigten Königreich inkubiert wurden .

Die PLS-Analysen wurden durchgeführt, um den Zusammenhang zwischen dem Gehalt der hier quantifizierten Polyphenol-Untergruppenkombinationen und der anthelmintischen Aktivität von Heideextrakten, gemessen anhand der oviziden Aktivität (LD50), zu bewerten. Die Variation im Polyphenol-Untergruppengehalt erklärte 66,2 % bzw. 69,1 % der Variation in den LD50-Werten für T. Circumcincta und T. Colubriformis. Die Polyphenol-Untergruppen, die am wichtigsten mit den LD50-Werten für Eier von T. Circumcincta assoziiert waren (VIP ≥ 1), waren Galloyl- und Myricetin-Derivate sowie PC-Untereinheiten von PAs; bei T. colubriformis-Eiern waren dies Galloyl-, Chinasäure- und Kaempferol-Derivate sowie PC-Untereinheiten von PAs (Tabelle 5).

Um den Zusammenhang zwischen der Variation der quantifizierten Polyphenol-Untergruppengehalte und der Variation der anthelmintischen Aktivität, gemessen durch die Verringerung der Motilität, zu bestimmen, haben wir aufgrund einer unzureichenden Anzahl von Motilitätsmessungen für E. cinerea nur C. vulgaris-Extrakte in die Analyse einbezogen Proben. PLS-Analysen zeigten, dass die Variation im Polyphenol-Untergruppengehalt 41,8 % bzw. 85,0 % der Variation in den Motilitätswerten für T. Circumcincta und T. Colubriformis erklärte. Die Polyphenol-Untergruppen, die am stärksten mit den Motilitätswerten von T. Circumcincta L3 assoziiert waren (VIP ≥ 1), waren Galloyl- und Quercetin-Derivate sowie PC-Untereinheiten von PAs; für T. colubriformis L3 waren dies Derivate von Kaempferol und Chinasäure (Tabelle 6).

Nach unserem Kenntnisstand war dies die erste Studie, in der die anthelmintische Wirksamkeit eines in vielen europäischen Ländern heimischen Strauchs umfassend und vergleichend untersucht wurde. Im Rahmen dieser Studie haben wir die anthelmintischen Eigenschaften des europäischen Heidekrauts charakterisiert und quantifiziert und spezifische Arten von Verbindungen im Heidekraut identifiziert, die mit anthelmintischen Wirkungen in Verbindung gebracht werden können, und welche dieser Verbindungen speziell mit der oviziden oder Motilitätshemmung von GIN verbunden sein können. Wir beobachteten Unterschiede im Polyphenolgehalt der Extrakte aus den verschiedenen Ländern. Es ist möglich, dass die Umweltbedingungen an den Sammelstellen zu dieser Variation beitragen, einschließlich der Lichtintensität [43], der Stickstoffzugabe (N) [44] und der Beweidung [45], da diese Faktoren bekanntermaßen den Polyphenolgehalt in Pflanzen beeinflussen. Wir stellten die Hypothese auf, dass die beobachtete anthelmintische Aktivität der Heideextrakte durch den Tanningehalt (PAs und hydrolysierbar) bestimmt wird, und diese Hypothese wurde verworfen. Schwankungen im Tanningehalt, insbesondere PC-Typ-PAs der Heideextrakte, waren mit einer gewissen Schwankung der anthelmintischen Aktivität, hauptsächlich der oviziden Aktivität, verbunden. Wir haben jedoch gezeigt, dass andere Polyphenolgruppen und möglicherweise nicht-polyphenolische Verbindungen für einen Teil der beobachteten Wirksamkeit verantwortlich sein müssen, insbesondere für die Hemmung der Larvenmotilität. Beispielsweise war auch der Gehalt an Flavonolen wie Kaempferol und Myricetin-Derivaten eng mit der anthelmintischen Wirksamkeit verbunden. Wir stellten außerdem die Hypothese auf, dass die anthelmintische Aktivität von Heideextrakten je nach GIN-Art und Lebensstadium variiert, was bestätigt wurde, da T. Circumcincta anfälliger war als T. Colubriformis und Eier anfälliger waren als Larven.

Die beobachtete Variation in der Kombination der in den Heideextrakten quantifizierten Polyphenol-Untergruppen war mit der beobachteten Variation der oviziden Aktivität (LD50) verbunden, was 66–69 % der Variation der LD50-Werte erklärt. Die Polyphenol-Untergruppen, die nachweislich einen stärkeren Einfluss auf die LD50-Werte (VIP ≥ 1) hatten, waren Galloyl-Derivate und PC-Typ-PAs sowie Myricetin-Derivate für T. Circumcincta und Kaempferol und Chinasäure-Derivate für T. Colubriformis. Bei beiden GIN-Arten zeigten PAs vom PC-Typ einen mäßig negativen Zusammenhang mit LD50, was darauf hindeutet, dass PAs und insbesondere der PC-Typ zumindest für eine gewisse anthelmintische Aktivität verantwortlich sind. Dies könnte früheren Erkenntnissen widersprechen, die zeigen, dass PAs vom PD-Typ im Vergleich zu PAs vom PC-Typ einen stärkeren Zusammenhang mit der anthelmintischen Wirkung haben [16, 46, 47]; Allerdings war der Gehalt an PAs vom PD-Typ in den Heideextrakten gering (durchschnittlich 0,30 mg/g, SE: 0,04), und frühere Beweise stammen hauptsächlich aus Tests an Larvenstadien und nicht an Eiern, die schlüpfen. Unsere Daten zeigten, dass die Zugabe von PVPP die Hemmung des Eischlüpfens weitgehend umkehrte, mit einer durchschnittlichen Umkehrung der Schlupfrate von 81,31 % (SE: 2,62), obwohl PVPP bei der Bindung von PAs nicht streng spezifisch ist, da es auch an galloylierte Flavonoide binden kann [48, 49]. Unsere Daten belegen, dass PAs für einen Teil der beobachteten anthelmintischen Aktivität verantwortlich sind. Frühere Studien haben gezeigt, dass einige Flavonole die anthelmintische Aktivität steigern können, indem sie synergistisch mit PAs wirken [14, 29, 50]; Unsere Daten zeigten, dass zwei von uns analysierte Flavonole, Myricetin- und Kaempferol-Derivate, einen mäßig positiven Zusammenhang mit LD50 hatten (dh eine geringere Wirksamkeit). Da es unwahrscheinlich ist, dass diese Flavonole das Ausbrüten von Eiern verbessern würden, könnte hier auf eine antagonistische Beziehung hingewiesen werden, die auf strukturelle Unterschiede zwischen den PAs und den anderen Verbindungen zurückzuführen sein könnte [51].

Im Gegensatz zur Ähnlichkeit der Zusammenhänge zwischen dem Gehalt an Polyphenol-Untergruppen und den LD50-Werten für die beiden GIN-Arten erklärte die relative Häufigkeit der Polyphenol-Untergruppen im Larvenmobilitätstest 85 % der Variation bei T. colubriformis, aber nur 42 % der Variation bei T. colubriformis .circumcincta. Dies deutet darauf hin, dass der Großteil der anthelmintischen Wirkung gegen T. Circumcinta-Larven auf hier nicht quantifizierte Verbindungen zurückzuführen ist, wie beispielsweise nicht-polyphenolische Verbindungen; Im Gegensatz dazu zeigten die quantifizierten Polyphenol-Untergruppen die meisten anthelmintischen Wirkungen gegen T. colubriformis-Larven. In den T. colubriformis-Larvenmobilitätstests war die verminderte Motilität mäßig mit dem Gehalt an Kaempferol und Chinasäurederivaten verbunden (VIP ≥ 1). Flavonoidgruppen, einschließlich Flavonole, wurden zuvor mit einer Aktivität auf die L3-Exhüllende von Haemonchus contortus in Verbindung gebracht [50], was darauf hindeutet, dass die Ergebnisse der vorliegenden Studie zeigen, dass diese Gruppen tatsächlich Aktivität bei anderen GIN-Arten zeigen. Da eine Kombination von Polyphenol-Untergruppen moderate negative Assoziationen und VIP ≥ 1 aufwies, könnte dies auf additive anthelmintische Wirkungen hinweisen, obwohl mögliche synergistische Wirkungen anhand dieser Ergebnisse nicht bestimmt werden können. In den Larvenmobilitätstests von T. Circumcincta waren die Gruppen, die stärker mit der Motilität assoziiert waren, Galloyl- und Quercetin-Derivate sowie PAs vom PC-Typ.

Unsere Ergebnisse zeigen, dass die Anfälligkeit für die Heideextrakte bei den beiden GIN-Arten im Lebensstadium unterschiedlich war; Beispielsweise wurde das Schlüpfen von Eiern am stärksten durch Heidekrautextrakte aus dem Vereinigten Königreich und Spanien und am wenigsten durch Extrakte aus Norwegen beeinträchtigt, wohingegen die Larvenmotilität von T. Circumcincta am stärksten durch die norwegischen Extrakte beeinträchtigt wurde, obwohl sie sich immer noch erheblich von den toten Kontrolllarven unterschied. Eier von Teladorsagia Circumcincta waren anfälliger für die Inkubation in Heideextrakten aus im Winter gesammelten Proben als Eier von T. colubriformis. Die im Frühjahr gesammelten Proben zeigten auch eine höhere anthelmintische Aktivität auf Eiern beider GIN-Arten im Vergleich zu den im Winter gesammelten, während Winterextrakte bei Tests an T. colubriformis-Larven die Motilität stärker senkten als Frühlingsextrakte. Die zwischen den beiden In-vitro-Tests beobachtete Inkonsistenz könnte darauf hindeuten, dass die Kombination von Polyphenol-Untergruppen in diesen Extrakten je nach Lebensstadium des Parasiten unterschiedlich interagiert. Die Assoziation von Polyphenol-Untergruppen mit den Brutergebnissen von Eiern war für beide GIN-Arten konsistent, was darauf hindeutet, dass diese Aktivität nicht artspezifisch war. Da Eier von T. Circumcincta bei EHA jedoch anfälliger waren als T. Colubriformis, scheint es, dass die Wechselwirkungen dieser Polyphenol-Untergruppen mit spezifischen Parasitenproteinen kann hier wichtig sein. Dies zeigt sich auch bei den Motilitätswerten der Larven, da die Variation, die den Polyphenol-Untergruppen zugeschrieben werden konnte, zwischen 42 % für T. Circumcincta-Larven und 85 % für T. Colubriformis-Larven lag. Diese Ergebnisse stimmen mit denen überein, die in früheren Studien zur Bewertung der Wirksamkeit bioaktiver Pflanzenextrakte auf T. colubriformis und T. Circumcincta berichtet wurden, wobei lebensphasenspezifische [52,53,54] und artspezifische [55,56,57] berücksichtigt wurden ] Anfälligkeit wurde beobachtet.

Wir haben gezeigt, dass ein wesentlicher Teil der Variation in der anthelmintischen Aktivität durch Änderungen im Gehalt an Polyphenol-Untergruppen erklärt wurde; In beiden getesteten Lebensstadien zeigten mehrere Polyphenoltypen einen Zusammenhang mit der anthelmintischen Aktivität. Dieses Ergebnis stützt frühere Beweise dafür, dass Polyphenolgruppen miteinander interagieren können [58]. Unsere Ergebnisse weisen in einigen Fällen auf antagonistische Wechselwirkungen und in anderen auf additive Effekte hin. Es ist zu beachten, dass nicht jede Variation der anthelmintischen Aktivität mit dem Gehalt an Polyphenol-Untergruppen im Extrakt in Verbindung gebracht werden kann; Darüber hinaus war die Auswirkung auf das Schlüpfen der Eier keine vollständige Umkehrung der Werte der Kontrollen nach der Inkubation der Extrakte mit PVPP. Folglich sollte der Schluss gezogen werden, dass es wahrscheinlich ist, dass andere Polyphenole, die hier nicht quantifiziert wurden, oder sogar nicht-polyphenolische Verbindungen zu einem Teil der beobachteten anthelmintischen Aktivität beitragen.

Während unsere Ergebnisse einen signifikanten Einfluss von Heideextrakten auf das Schlüpfen von Eiern und die infektiöse Larvenmotilität in vitro zeigten, ist eine In-vivo-Validierung erforderlich, bevor sie möglicherweise zur Parasitenbekämpfung in kleinen Wiederkäuersystemen eingesetzt werden können. Die Ergänzung von Heidekraut bei Ziegen war mit einer verminderten Eiproduktion und Larvenbildung verbunden [25], wenn sie in einer Menge von 30 % ihrer Nahrung aufgenommen wurde, verringerte jedoch nur unwesentlich die Anzahl der Kot-Eier, wenn sie in der Nahrung von parasitierten Schafen in einer Menge von 11 % ihrer DM-Aufnahme enthalten war [59] . Weitere Untersuchungen sind erforderlich, um festzustellen, ob die im Heidekraut enthaltenen Wirkstoffe Auswirkungen haben, wenn Heidekraut von Schafen beweidet wird. Alternativ könnte die Verabreichung von Heidekraut in Form eines Extrakts eine weitere Möglichkeit für die Verwendung von Heidekraut zur Parasitenbekämpfung sein, beispielsweise als Anthelminthikum, da ein solches Verfahren für andere Pflanzen nachgewiesen wurde [60]. Dies wäre insbesondere dann relevant, wenn natürlich beweidetes Heidekraut nicht zu einer ausreichenden Aufnahme von Wirkstoffen führen würde, um eine Parasitenbekämpfung in vivo zu erreichen.

Die Ergebnisse dieser Studie zeigten in vitro eine anthelmintische Aktivität von Heideextrakten gegen häufige GINs von Schafen. Variationen in der anthelmintischen Aktivität waren mit Unterschieden im Gehalt der Polyphenol-Untergruppen der Extrakte verbunden. Spezifische Polyphenol-Untergruppen innerhalb der Heideextrakte, wie z. B. PAs, erwiesen sich als wichtig für die Erklärung der Variation von LD50 und Larvenmotilität. Es scheint jedoch, dass die in der vorliegenden Studie identifizierten Gruppen nicht die einzigen sind, die zu den anthelmintischen Wirkungen beitragen. Eine zusätzliche Untersuchung der Beziehungen zwischen verschiedenen Gruppen von Verbindungen, ob sie synergistische oder antagonistische Wirkungen haben, würde dazu beitragen, die Verwendung von Heidekraut zu optimieren, um den Einsatz von Anthelminthika in der Tierproduktion zu reduzieren.

Ein Belegexemplar des verwendeten Heidepflanzenmaterials wird im Roslin Institute, Edinburgh, aufbewahrt. Alle für die Schlussfolgerungen verwendeten Daten sind in diesem veröffentlichten Artikel und in den ergänzenden Materialien enthalten. Die in der vorliegenden Studie verwendeten und/oder analysierten Datensätze sind auf begründete Anfrage beim entsprechenden Autor erhältlich.

Varianzanalyse

Dimethylsulfoxid

Eierschlüpftest

Magen-Darm-Nematode

Infektiöse Larven im dritten Stadium

Tödliche Dosis für 50 % Hemmung

Proanthocyanidin

Procyanidin

Hauptkomponentenanalyse

Prodelphinidin

Teilweise kleinste Quadrate

Phosphatgepufferte Kochsalzlösung

Pflanzliche sekundäre (oder spezialisierte) Metaboliten

Polyvinylpolypyrrolidon

Gerbsäureäquivalent

Ultraleistungsflüssigkeitschromatographie-Tandem-Massenspektrometrie

Variable Bedeutung in der Projektion

Vaarst M, Padel S, Younie D, Hovi M, Sundrum A, Rymer C. Tiergesundheitsherausforderungen und veterinärmedizinische Aspekte der ökologischen Nutztierhaltung, identifiziert durch ein dreijähriges EU-Netzwerkprojekt. Open Vet Sci J. 2008;2:111–6.

Artikel Google Scholar

Charlier J, Thamsborg SM, Bartley DJ, Skuce PJ, Kenyon F, Geurden T, et al. Beachten Sie die Lücken in der Forschung zur Bekämpfung von Magen-Darm-Nematoden bei Nutzwiederkäuern und Schweinen. Transbound Emerg Dis. 2018;65:217–34.

Artikel PubMed Google Scholar

Charlier J, van der Voort M, Kenyon F, Skuce P, Vercruysse J. Jagd auf Helminthen und ihre wirtschaftlichen Auswirkungen auf Nutzwiederkäuer. Trends Parasitol. 2014;30:361–7.

Artikel PubMed Google Scholar

Charlier J, Rinaldi L, Musella V, Ploeger HW, Chartier C, Vineer HR, et al. Erste Einschätzung der wirtschaftlichen Belastung der Wiederkäuer-Viehwirtschaft in Europa durch schwere parasitäre Helmintheninfektionen. Vorheriger Tierarzt Med. 2020;182:105103.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Lindqvist A, Ljungström BL, Nilsson O, Waller PJ. Dynamik, Prävalenz und Auswirkungen von Nematodeninfektionen bei Schafen aus biologischer Tierhaltung in Schweden. Acta Vet Scand. 2001;42:377–89.

Artikel CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Burgess CGS, Bartley Y, Redman E, Skuce PJ, Nath M, Whitelaw F, et al. Eine Übersicht über die auf britischen Schaffarmen vorkommenden Trichostrongylid-Nematodenarten und die damit verbundenen Methoden zur Bekämpfung von Anthelminthika. Tierarzt Parasitol. 2012;189:299–307.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Mavrot F, Hertzberg H, Torgerson P. Auswirkung einer gastrointestinalen Nematodeninfektion auf die Leistung von Schafen: eine systematische Überprüfung und Metaanalyse. Parasiten-Vektoren. 2015;8:1–11.

Artikel Google Scholar

Bellet C, Green MJ, Vickers M, Forbes A, Berry E, Kaler J. Ostertagia spp., Pansen- und Leberegel-Einzel- und Mehrfachinfektionen bei Rindern: eine Schlachthofstudie über Prävalenz und Auswirkungen auf die Produktion in England und Wales. Vorheriger Tierarzt Med. 2016;132:98–106.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Sangster NC, Cowling A, Woodgate RG. Zehn Ereignisse, die die Anthelminthika-Resistenzforschung definiert haben. Trends Parasitol. 2018;34:553–63.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Willer H, Trávníček J, Meier C, Schlatter B. Die Welt des ökologischen Landbaus: Statistiken und neue Trends 2021. Frick/Bonn: Forschungsinstitut für biologischen Landbau (FiBL)/IFOAM-Organics International. https://www.evidensia.eco/resources/1122/the-world-of-organic-agriculture-statistics-and-emerging-trends-2021/. Zugriff am 1. November 2021

Osoro K, Mateos-Sanz A, Frutos P, García U, Ortega-Mora LM, Ferreira LM, et al. Anthelmintische und ernährungsphysiologische Wirkung der Heidekrautergänzung auf Kaschmirziegen, die Weiden mit mehrjährigem Weidelgras und Weißklee grasen. J Anim Sci. 2007;85:861–70.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Tolera A, Khazaal K, Ørskov ER. Nährwertbewertung einiger Grasarten. Anim Feed Sci Technol. 1997;67:181–95.

Artikel Google Scholar

Bahuaud D, Martinez-Ortiz De Montellano C, Chauveau S, Prevot F, Torres-Acosta F, Fouraste I, et al. Auswirkungen von vier Gerbstoffpflanzenextrakten auf die In-vitro-Exhüllende von Larven parasitärer Nematoden im dritten Stadium. Parasitologie. 2006;132:545–54.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Malisch CS, Salminen JP, Kölliker R, Engström MT, Suter D, Studer B, et al. Dürreeffekte auf Proanthocyanidine in Esparsette (Onobrychis viciifolia Scop.) hängen vom ontogenetischen Stadium der Pflanze ab. J Agrarlebensmittelchemie. 2016;64:9307–16.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Zarza-Albarrán MA, Olmedo-Juárez A, Rojo-Rubio R, Mendoza-de Gives P, González-Cortazar M, Tapia-Maruri D, et al. Galloylflavonoide aus Acacia farnesiana-Schoten besitzen eine starke anthelmintische Wirkung gegen Eier und infektiöse Larven von Haemonchus contortus. J Ethnopharmacol. 2020;249:112402.

Artikel PubMed Google Scholar

Quijada J, Fryganas C, Ropiak HM, Ramsay A, Mueller-Harvey I, Hoste H. Anthelmintische Aktivitäten gegen Haemonchus contortus oder Trichostrongylus colubriformis bei kleinen Wiederkäuern werden durch Strukturmerkmale kondensierter Tannine beeinflusst. J Agrarlebensmittelchemie. 2015;63:6346–54.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Athanasiadou S, Kyriazakis I. Pflanzliche Sekundärmetaboliten: antiparasitäre Wirkungen und ihre Rolle in Produktionssystemen von Wiederkäuern. Proc Nutr Soc. 2004;63:631–9.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Moreno-Gonzalo J, Manolarak F, Fruits P, Hervas G, Celaya R, Bear K, et al. In-vitro-Wirkung von Heidekrautextrakten (Ericaceae) auf verschiedene Entwicklungsstadien von Teladorsagiacircumcincta und Haemonchus contortus. Tierarzt Parasitol. 2013;197:235–43.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Moreno-Gonzalo J, Manolarak F, Fruits P, Hervas G, Celaya R, Bear K, et al. In-vitro-Wirkung von Heideextrakten auf Eier, Larven und erwachsene Tiere von Trichostrongylus colubriformis. Tierarzt Parasitol. 2013;197:586–94.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Gonzalez-Hernandez MP, Karchesy J, Starkey EE. Forschungsbeobachtung: hydrolysierbare und kondensierte Tannine in Pflanzen der Wälder im Nordwesten Spaniens. J Range Manager 2003;56:461–5.

Artikel Google Scholar

Hunt AJ. Die Gewinnung hochwertiger Chemikalien aus Heidekraut (Calluna vulgaris). Doktorarbeit. York: Universität York; 2006. https://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.434011.

Zhao J. Die Gewinnung hochwertiger Chemikalien aus Heidekraut (Calluna vulgaris) und Adlerfarn (Pteridium aquilinum). Doktorarbeit. York: Die Universität York; 2011. http://search.proquest.com/docview/304952240?accountid=27797.

Frutos P, Moreno-Gonzalo J, Hervás G, García U, Ferreira LMM, Celaya R, et al. Geht die anthelmintische Wirkung der Heidekrautergänzung bei weidenden Ziegen immer mit einer ernährungshemmenden Wirkung einher? Tier. 2008;2:1449–56.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Celaya R, Ferreira LMM, Moreno-Gonzalo J, Frutos P, Hervás G, Ferre I, et al. Auswirkungen der Ergänzung mit Heidekraut und Hafer auf Magen-Darm-Nematodeninfektionen und die Leistung grasender Kaschmirziegen. Kleiner Rumin Res. 2010;91:186–92.

Artikel Google Scholar

Moreno-Gonzalo J, Osoro K, García U, Frutos P, Celaya R, Ferreira LMM, et al. Anthelmintische Wirkung von Heidekraut bei experimentell mit Trichostrongylus colubriformis infizierten Ziegen. Parasitol Res. 2014;113:693–9.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Gutu K. Bioassay-gesteuerte phytochemische Untersuchung einheimischer Heilpflanzen Äthiopiens. Doktorarbeit; Edinburgh: Universität Edinburgh; 2017. https://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.738752.

Downey MO, Hanlin RL. Vergleich von Ethanol- und Acetonmischungen zur Extraktion von kondensiertem Tannin aus Traubenschalen. Südafrika J Enol Vitic. 2010;31:154–9.

CAS Google Scholar

Azwanida NN. Ein Überblick über die in Heilpflanzen verwendeten Extraktionsmethoden, Prinzip, Stärke und Grenzen. Med Aromat Plants. 2015;04:3–8.

Google Scholar

Klongsiriwet C, Quijada J, Williams AR, Mueller-Harvey I, Williamson EM, Hoste H. Synergistische Hemmung der Haemonchus contortus-Ummantelung durch Flavonoidmonomere und kondensierte Tannine. Int J Parasitol Drugs Drug Resistenz. 2015;5:127–34.

Artikel PubMed PubMed Central Google Scholar

Salminen JP. Zweidimensionale Tannin-Fingerabdrücke mittels Flüssigchromatographie-Tandem-Massenspektrometrie bieten eine neue Dimension der pflanzlichen Tanninanalyse und helfen, die Tanninvielfalt in Pflanzen sichtbar zu machen. J Agrarlebensmittelchemie. 2018;66:9162–71.

Artikel CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Engström MT, Pälijärvi M, Fryganas C, Grabber JH, Mueller-Harvey I, Salminen JP. Schnelle qualitative und quantitative Analysen von Proanthocyanidin-Oligomeren und -Polymeren mittels UPLC-MS/MS. J Agrarlebensmittelchemie. 2014;62:3390–9.

Artikel PubMed Google Scholar

Engström MT, Pälijärvi M, Salminen JP. Schnelle Fingerabdruckanalyse von Pflanzenextrakten auf Ellagitannine, Gallussäure und Chinasäurederivate sowie Flavonolglykoside auf Quercetin-, Kaempferol- und Myricetin-Basis mittels UPLC-QqQ-MS/MS. J Agrarlebensmittelchemie. 2015;63:4068–79.

Artikel PubMed Google Scholar

Martínez-Valladares M, Geurden T, Bartram DJ, Martínez-Pérez JM, Robles-Pérez D, Bohórquez A, et al. Resistenz gastrointestinaler Nematoden gegen die am häufigsten verwendeten Anthelminthika bei Schafen, Rindern und Pferden in Spanien. Tierarzt Parasitol. 2015;211:228–33.

Artikel PubMed Google Scholar

Christie M, Jackson F. Spezifische Identifizierung von Strongyliden-Eiern in kleinen Schafkotproben. Res Vet Sci. 1982;32:113–7.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Boyd WA, McBride SJ, Rice JR, Snyder DW, Freedman JH. Eine Hochdurchsatzmethode zur Bewertung der chemischen Toxizität mithilfe eines Caenorhabditis elegans-Reproduktionstests. Toxicol Appl Pharmacol. 2010;245:153–9.

Artikel CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Lem MF, Vincent KP, Josue WP, Jeannette Y, Gertrude MT, Joseph T. In vitro ovizide und larvizide Aktivitäten der Stammrinde von Terminalia glaucescens (Combretaceae) gegen Haemonchus contortus. Bin J Plant Sci. 2014;5:2859–68.

Artikel Google Scholar

Zabré G, Kaboré A, Bayala B, Katiki LM, Costa-Júnior LM, Tamboura HH, et al. Vergleich der in vitro anthelmintischen Wirkungen von Acacia nilotica und Acacia raddiana. Parasiten. 2017; 24:44.

Artikel PubMed PubMed Central Google Scholar

Smout MJ, Kotze AC, Mccarthy JS, Loukas A. Ein neuartiger Hochdurchsatztest für das Screening von Anthelminthika und die Resistenzdiagnose durch Echtzeitüberwachung der Parasitenmotilität. PLoS Negl Trop Dis. 2010;4:e885.

Artikel PubMed PubMed Central Google Scholar

Athanasiadou S, Almvik M, Hellström J, Madland E, Simic N, Steinshamn H. Chemische Analyse und anthelmintische Aktivität gegen Teladorsagiacircumcincta von nordischen Rindenextrakten in vitro. Front Vet Sci. 2021;8:666924.

Artikel PubMed PubMed Central Google Scholar

Wickham H, Hester J, Chang W. Paket devtools v 2.4.2. 2021. https://github.com/r-lib/devtools. Zugriff am 15. Februar 2022.

Vu VQ. Paket ggbiplot v 0.55. 2011. https://github.com/vqv/ggbiplot. Zugriff am 15. Februar 2022.

Le Cao KA, Rohart F, Gonzalez I, Dejean S, Abadi A, Gautier B, et al. Paket mixOmics v 6.10.9. 2020. https://cran.microsoft.com/snapshot/2017-09-17/web/packages/mixOmics/mixOmics.pdf. Zugriff am 15. Februar 2022.

Gaudio N, Balandier P, Dumas Y, Ginisty C. Wachstum und Morphologie von drei Waldunterholzarten (Calluna vulgaris, Molinia caerulea und Pteridium aquilinum) entsprechend der Lichtverfügbarkeit. Für Ecol Manage. 2011;261:489–98.

Artikel Google Scholar

Hofland-Zijlstra JD, Berendse F. Die Wirkung von Nährstoffversorgung und Lichtintensität auf Tannine und Mykorrhizabesiedlung in niederländischen Heideökosystemen. Pflanzenöko. 2009;201:661–75.

Artikel Google Scholar

Hagerman AE, Robbins CT, Weerasuriya Y, Wilson TC, Mcarthur C. Tanninchemie in Bezug auf die Verdauung. J Range Manager 1992;45:57–62.

Artikel Google Scholar

Naumann HD, Tedeschi LO, Zeller WE, Huntley NF. Die Rolle kondensierter Tannine in der Tierproduktion von Wiederkäuern: Fortschritte, Einschränkungen und zukünftige Richtungen. Rev Bras Zootec. 2017;46:929–49.

Artikel Google Scholar

Desrues O, Peña-Espinoza M, Hansen TVA, Enemark HL, Thamsborg SM. Antiparasitäre Wirkung von pelletierter Esparsette (Onobrychis viciifolia) gegen Ostertagia ostertagi und Cooperia oncophora bei Kälbern. Parasitenvektoren. 2016;9:1–10.

Artikel Google Scholar

Verza SG, Pavei C, Ortega GG. Untersuchung der Spezifität von Kreuzpovidon (PVPP) als Bindemittel bei der Quantifizierung polyphenolischer Verbindungen. J Braz Chem Soc. 2008;19:1627–33.

Artikel CAS Google Scholar

Barrau E, Fabre N, Fouraste I, Hoste H. Wirkung bioaktiver Verbindungen aus Esparsette (Onobrychis viciifolia Scop.) auf die In-vitro-Larvenmigration von Haemonchus contortus: Rolle von Tanninen und Flavonolglycosiden. Parasitologie. 2005;131:531–8.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Mengistu G, Hoste H, Karonen M, Salminen JP, Hendriks WH, Pellikaan WF. Die in vitro anthelmintischen Eigenschaften von Graspflanzenarten gegen Haemonchus contortus werden durch den Polyphenolgehalt und die Zusammensetzung bestimmt. Tierarzt Parasitol. 2017;237:110–6.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Escareño-Diaz S, Alonso-Diaz MA, Mendoza de Gives P, Castillo-Gallegos E, von Son-de Fernex E. Anthelminthische Aktivität von Polyphenolverbindungen und ihre Wechselwirkungen gegen den Rindernematoden Cooperia punctata. Tierarzt Parasitol. Rev. 2019;274:1

Artikel PubMed Google Scholar

Hounzangbe-Adote S, Fouraste I, Moutairou K, Hoste H. In-vitro-Effekte von vier tropischen Pflanzen auf die Aktivität und Entwicklung des parasitären Nematoden Trichostrongylus colubriformis. J Helminthol. 2005;79:29–33.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Tibe O, Sutherland IA, Lesperance L, Harding DRK. Die Wirkung gereinigter kondensierter Tannine von Futterpflanzen aus Botswana auf die frei lebenden Stadien gastrointestinaler Nematodenparasiten bei Nutztieren. Tierarzt Parasitol. 2013;197:160–7.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Al-Rofaai A, Rahman WA, Sulaiman SF, Yahaya ZS. In-vitro-Aktivität von Neem (Azadirachta indica) und Maniok (Manihot esculenta) auf drei präparasitäre Stadien anfälliger und resistenter Stämme von Teladorsagia (Ostertagia)circumcincta. Tierarzt Parasitol. 2012;188:85–92.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Molan AL, Sivakumaran S, Spencer PA, Meagher LP. Flavan-3-ole aus grünem Tee und oligomere Proanthocyanidine hemmen in vitro die Motilität infektiöser Larven von Teladorsagiacircumcincta und Trichostrongylus colubriformis. Res Vet Sci. 2004;77:239–43.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Paolini V, Fouraste I, Koste H. In-vitro-Wirkungen von drei Holzpflanzen- und Esparsettenextrakten auf Larven im 3. Stadium und erwachsene Würmer von drei gastrointestinalen Nematoden. Parasitologie. 2004;129:69–77.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Athanasiadou S, Kyriazakis I, Jackson F, Coop RL. Direkte anthelmintische Wirkung kondensierter Tannine auf verschiedene gastrointestinale Nematoden von Schafen: In-vitro- und In-vivo-Studien. Tierarzt Parasitol. 2001;99:205–19.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Mueller-Harvey I, Bee G, Dohme-Meier F, Hoste H, Karonen M, Kölliker R, et al. Vorteile von kondensierten Tanninen in Futterhülsenfrüchten, die an Wiederkäuer verfüttert werden: Bedeutung von Struktur, Konzentration und Nahrungszusammensetzung. Crop Sci. 2019;59:861–85.

Artikel CAS Google Scholar

Maurer V, Holinger M, Oberhänsli T, Thüer S, Werne S, Shepherd F, et al. Die Ergänzung mit Heidekraut (Calluna vulgaris) verringert nicht die Fangfähigkeit von Duddingtonia flagrans im Kot von mit Haemonchus contortus infizierten Lämmern. Tierarzt Parasitol. 2022;302:109661.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Minho AP, Bueno ICS, Louvandini H, Jackson F, Gennari SM, Abdalla AL. Wirkung des Tanninextrakts aus Acacia molissima auf die Bekämpfung von Magen-Darm-Parasiten bei Schafen. Anim Feed Sci Technol. 2008;147:172–81.

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Die anfängliche Parasitendosis, die den Spenderlämmern verabreicht wurde, wurde freundlicherweise vom Moredun Research Institute und der Toulouse Veterinary School zur Verfügung gestellt. Wir möchten dem Farmpersonal und den Technikern der SRUC Easter Howgate Farm für ihre Hilfe bei der Pflege der Spenderlämmer danken. Vielen Dank an Harry Shepherd für die Unterstützung bei der Verbesserung der PCA-Plots.

Diese Arbeit wurde durch die Horizon 2020-Initiative „Replacement of Contentious Inputs in Organic Farming Systems“ (RELACS) der Europäischen Union mit der Fördernummer 100-2020 gefördert. 773431. SRUC dankt der schottischen Regierung für die Finanzierung.

Scotland's Rural College (SRUC), Easter Bush Campus, Midlothian, Großbritannien

Francesca Shepherd, Caroline Chylinski, Michael R. Hutchings, Joana Lima, Ross Davidson und Spiridoula Athanasiadou

Royal (Dick) School of Veterinary Studies [R(D)SVS] – das Roslin Institute, University of Edinburgh, Easter Bush Campus, Midlothian, Großbritannien

Francesca Shepherd, Robert Kelly und Alastair Macrae

Fakultät für Chemie, Universität Turku, Turku, Finnland

Juha-Pekka Salminen & Marica T. Engström

Forschungsinstitut für biologischen Landbau (FiBL), Frick, Schweiz

Veronika Maurer

Norwegisches Institut für Bioökonomieforschung (NIBIO), Tingvoll, Norwegen

Håvard Steinshamn

Naturland Association for Organic Agriculture, Gräfelfing, Germany

Susanne Fittje

Asociación Valor Ecologico (ECOVALIA), CAAE-Vereinigung, Sevilla, Spanien

Angela Morell Perez

Regionaler Dienst für Agrarlebensmittelforschung und -entwicklung (SERIDA), Villaviciosa, Asturien, Spanien

Rocío Rosa García

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SA entwarf das Projekt, koordinierte die Studie und verfasste und überprüfte das Manuskript. FS führte alle Experimente durch und verfasste das Manuskript. CC unterstützte beim Studiendesign, der Probenentnahme und überprüfte das Manuskript. JL und RD halfen bei der statistischen Analyse. MH, AM und RK halfen beim Studiendesign und überprüften das Manuskript. J-PS und ME führten die chemische Analyse der Heideproben durch und überprüften das Manuskript. VM, HS, SF, AMP und RRG stellten Heideproben zur Verfügung, halfen beim Studiendesign und überprüften das Manuskript. Alle Autoren haben das endgültige Manuskript gelesen und genehmigt.

Korrespondenz mit Spiridoula Athanasiadou.

Alle Spenderlämmer wurden gemäß dem Animal (Scientific Procedures) Act 1986 gehalten. Die Studie wurde vom Tierversuchsausschuss der SRUC genehmigt (SHE AE 13–2019 und SHE AE 15–2020) und unter der Lizenz des britischen Innenministeriums (P1B4DFBA5) durchgeführt.

Unzutreffend.

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden Interessen haben.

Springer Nature bleibt neutral hinsichtlich der Zuständigkeitsansprüche in veröffentlichten Karten und institutionellen Zugehörigkeiten.

. RELACS: Heather-Probenahmeprotokoll. Abbildung S1. Sammlung von 10 Heidekrautproben im „W“-Muster auf einer Fläche von 10 m2.

. Umweltbedingungen an Sammelstellen für Heidekraut.

. Durchschnittliche Brutzeit (%) und Standardabweichung (SE) für C. vulgaris-Extrakte bei abnehmenden Konzentrationen (n = 3). Tabelle S3. Durchschnittliche Brutzeit (%) und SE für spanische Heideproben bei abnehmenden Konzentrationen (n = 3).

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Nachdrucke und Genehmigungen

Shepherd, F., Chylinski, C., Hutchings, MR et al. Vergleichende Analyse der anthelmintischen Wirksamkeit europäischer Heidekrautextrakte auf das Schlüpfen von Eiern von Teladorsagia Circumcincta und Trichostrongylus colubriformis und die Larvenmotilität. Parasites Vectors 15, 409 (2022). https://doi.org/10.1186/s13071-022-05531-0

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Eingegangen: 22. Juni 2022

Angenommen: 28. September 2022

Veröffentlicht: 04. November 2022

DOI: https://doi.org/10.1186/s13071-022-05531-0

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Vergleichende Analyse der anthelmintischen Wirksamkeit europäischer Heidekrautextrakte auf das Schlüpfen von Eiern von Teladorsagia Circumcincta und Trichostrongylus colubriformis und die Larvenmotilität